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【包邮】探针法耐氟喹诺酮牛支原体实时定量PCR试剂盒

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商品参数

探针法耐氟喹诺酮牛支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Fluoroquinolone-Resistant Mycoplasma Bovis


货号规格
Mqt-abo-2020个反应
Mqt-abo-5050个反应
Mqt-abo-100100个反应

储存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反复冻融。

 

试剂盒特点:

1, 使用单核苷酸多态性PCR检测牛支原体喹诺酮抗性,检测单碱基突变。

2, 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点;采用热启动方式,可抑制非特异性扩增,降低背景荧光。

3, 带有阳性对照样品(组分C),可用于检验试剂盒有效性。

4, 带有UDG酶和dUTP,可降低残留DNA的污染。

5, 灵敏度高,检测极限相当于反应液中约含5个基因组。


商品说明

牛支原体(Mycoplasma Bovis)是最重要的致病性牛寄生支原体,呈全球流行趋势,可引起肺炎、关节炎、乳腺炎、中耳炎、结膜炎、生殖紊乱和流产等多种疾病,发病率达到60%-100%。在健康或患病的牛身上均可发现牛支原体,其疾病表现和对治疗和疫苗的反应常发生变化,诊断和控制较为困难,因此其流行程度常被低估。牛支原体引起的疾病常呈慢性发展,引起动物身体虚弱,抗生素疗效不明显,因此常引起难以估测的经济损失。由于缺乏有效的牛支原体疫苗,抗生素是最主要的控制手段。

氟喹诺酮是一类广谱而且高效的抗生素,常被用于治疗牛支原体感染。氟喹诺酮通过抑制DNA复制达到抗菌的目的,其抗性则是源于细菌的DNA螺旋酶和DNA拓扑异构酶IV发生突变,导致药物结合能力下降。突变点位于DNA螺旋酶的GyrA和GyrB亚基,和/或DNA拓扑异构酶IV 的ParC和ParE 亚基,这些区域统称为喹诺酮抗性决定区域(QRDR)。体内获得的喹诺酮抗性突变只存在于ParC基因。

对氟喹诺酮抗性的检测,通常做法是用体外分离培养的菌落做敏感性测试,需要花费很长的时间,有时需3-4周才能得到结果。PCR法检测时间短,仅需几个小时即可获得结果,还具有高灵敏度和高特异性的特点,因此是更好的选择。定量PCR法与普通PCR法相比,不仅可以精确定量,而且操作更为方便,更少受环境污染的影响。

本试剂盒采用双探针法,既可以检测牛支原体,也可以检测抗性菌株。选择parC基因作为靶点,对牛支原体喹诺酮抗性菌株进行单碱基多态性PCR鉴定。在牛支原体parC基因的265位点,碱基G突变为A导致一个天冬氨酸突变为天冬酰胺,赋予支原体喹诺酮抗性。在下游间隔一个碱基的267位点,一些菌株带有T突变为C的无效突变。本试剂盒通过鉴别265位点的突变来检测菌株的喹诺酮抗性。经BLAST验证,与其他生物的基因组无交叉反应。通过检测23种支原体和8种常见细菌,未见假阳性结果,而150个牛支原体菌株均得到了阳性信号,可见本试剂盒具有非常好的特异性。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探针、阳性对照品、ROX染料,和用以防止残余DNA污染的UDG(Uracil- DNA Glycosylase,尿嘧啶-DNA-糖基酶),用户只需准备好DNA样品即可使用。


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