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【包邮】探针法支原体污染实时定量PCR试剂盒

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商品参数

探针法支原体污染实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination


货号规格
Myco-qt-2020次反应
Myco-qt-5050次反应
Myco-qt-100100次反应

 

储存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反复冻融。


商品说明

支原体(Mycoplasma)是一种直径约为0.1-0.3 μm、无细胞壁的原核生物,属于柔膜菌纲(Mollicutes),常被用作柔膜菌纲的统称。支原体具有变形能力,可透过常见过滤膜(0.22-0.45 μm),因此常规的无菌过滤方法不能将其去除,靶向细胞壁的抗生素也对其无效。由于在光学显微镜下无法判断,细胞培养中的支原体污染是一个令人烦恼的问题。支原体种类繁多,目前已知的污染细胞的支原体有20多种,一般是由试剂和人工操作带入,95%的污染事件是由常见的五种支原体引起;由原代细胞的原始组织带入而形成的污染也有发生,污染的支原体种类分布较为广泛。根据细胞类型、来源和培养方法的不同,文献报道的细胞污染率在15-80%之间,极大影响了下游实验的进行,因此必须使用专门的方法检测这些污染。

传统的培养法操作比较繁琐,需要很长时间(最长需要28天),受操作人员的实验技能影响比较大,并且有些支原体种类不能体外培养。而PCR法可有效克服上述缺点。本试剂盒采用探针法对细胞污染进行PCR检测,使用通用性探针和引物,可识别超过150种支原体。常见的污染类型,如:猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)、唾液支原体(Mycoplasma salivarium)、口腔支原体(Mycoplasma orale)、精氨酸支原体(Mycoplasma arginini)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasma laidlawii)、发酵支原体(Mycoplasma fermentans)和肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae),均可以检出。根据易感程度和与人类的密切程度,选取12种支原体进行验证,灵敏度最高可达到每反应2个基因组,大部分种类灵敏度分布在每反应2-12个基因组,最低的是解脲脲原体,灵敏度为每反应86个基因组。本试剂盒适用于检测欧洲药典要求的所有支原体种类,大部分种类可以达到欧洲药典要求的10 CFU/ml的灵敏度,考虑到支原体培养条件和菌株活性的差异,少数种类的支原体难以判断是否符合这个要求。

试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探针、阳性对照品。探针在5`-端以FAM修饰,3`-端以MGB修饰。引物具有柔膜菌/支原体特异性,与真核生物无交叉反应,即使与亲缘关系较近的革兰氏阳性菌,如:丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae),也无交叉反应。DNA聚合酶源自极端嗜热菌(Thermus thermophilus),经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体,在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段,抗体受热被去除,此时DNA聚合酶活性恢复,因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染,提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。


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