猫支原体（Mycoplasma felis，M. felis）是一种无细胞壁病原体，可引起猫呼吸系统疾病。当前针对呼吸道M. felis感染的研究较为匮乏，既缺少成熟的分型体系，也缺乏全国范围的流行病学调查。本研究调查了2022年至2024年中国范围内猫呼吸道拭子样本（n?=?4329）中M. felis的流行情况。在382份来自呼吸道疾病猫的拭子样本中，研究人员评估了M. felis与猫疱疹病毒（feline herpesvirus，FHV）、猫杯状病毒（feline calicivirus，FCV）、猫衣原体（Chlamydia felis，C. felis）及支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica，Bb）的混合感染谱。研究人员分离获得15株代表性菌株并进行特征分析，以期为疾病防控与疫苗研发提供依据。
这些分离株的系统发育分析显示，除与M. gateae相关的菌株外，还存在两个新的进化分支：Myco分支（形成经典“煎蛋样”菌落）和Morella分支（形成“桑葚样”微菌落，且生长需要补充培养基）。不同菌株间观察到值得关注的代谢适应性差异。抗菌药物敏感性试验表明，不同分支对大环内酯类药物的敏感性存在差异（Morella?>?gateae?>?Myco），对氟喹诺酮类药物总体保持稳定敏感，同时已出现多西环素耐药趋势。体外毒力与过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）产生能力密切相关，其中Morella型M. felis-8与Myco型M. felis-28的H2O2产量最高。猫体内攻毒试验证实了不同菌株间致病力差异：M. felis-28可诱导严重呼吸道症状及肺组织病理损伤（炎性细胞浸润和组织结构破坏），而M. felis-8则主要诱导结膜损伤。交叉保护分析提示其抗原保守性有限，部分菌株如M. felis-47表现出较高自反应性（滴度?=?1:16），但遗传差异较大的菌株之间仅表现出极低交叉反应性（滴度?≤?1:2）。上述结果建立了区分致病分支的新型诊断框架，有助于促进靶向治疗干预，并为M. felis的合理疫苗研发策略提供指导。
该文发表于《Transboundary and Emerging Diseases》，围绕我国猫呼吸道猫支原体（Mycoplasma felis，M. felis）感染的流行现状、菌株进化分化、表型异质性及致病差异开展了系统研究。研究背景在于，M. felis是猫上呼吸道疾病、结膜炎和肺部感染的重要病原之一，但长期以来其研究明显滞后：一方面，临床症状与猫疱疹病毒、猫杯状病毒等感染相似，导致病原学鉴别困难；另一方面，该菌缺乏细胞壁、培养条件苛刻、分离纯化难度较高，使其分型体系、毒力机制和药物敏感性谱一直缺少系统阐明。尤其在中国，虽然若干地区已报告M. felis具有较高检出率，但全国尺度上的流行病学资料、菌株谱系差异和关键生物学特征仍未被系统刻画。因此，开展这项研究的核心意义在于补齐我国猫呼吸道支原体分子流行病学基础数据，明确其主要流行型别及其致病学差异，为临床诊断、精准用药和疫苗研发提供依据。
研究人员首先基于全国多地区采样，建立了猫呼吸道M. felis感染的大样本流行病学数据集；随后从阳性样本中分离代表性菌株，结合16S rRNA基因系统发育分析、菌落与超微结构观察、生长动力学与代谢特征比较、体外H2O2产量评价、药物最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）测定、猫感染模型验证以及抗体-抗原代谢抑制试验（metabolic inhibition test，MIT）等手段，比较不同菌株间的生物学差异。研究最终证实，中国流行的猫呼吸道M. felis并非单一均质群体，而是至少包含两个具有不同培养表型、系统发育地位、组织嗜性和致病特征的新分支，即Myco型与Morella型。这一发现的重要意义在于，它不仅改变了将M. felis笼统视为单一致病体的传统认识，也提示临床防控必须从“病原存在”进一步走向“分支识别”和“分型治疗”。
作者采用的主要关键技术方法可概括如下：其一，对2022—2024年来源于中国23个省份、涵盖宠物医院、猫舍和流浪猫群体的4329份猫口咽、鼻腔和结膜拭子进行PCR检测，并在382份呼吸道症状病例中开展多病原共感染分析；其二，从阳性样本中分离15株代表菌株，进行16S rRNA测序、系统发育树构建、Dienes染色、透射电镜观察及培养表型比较；其三，结合CCU法监测增殖动力学、pH变化和H2O2生成能力，评估体外毒力；其四，在SPF来源幼猫模型中进行鼻内攻毒，结合临床评分、组织病理学和qPCR分析组织分布；其五，通过MIC检测和MIT交叉抑制实验分析耐药谱与抗原交叉反应性。
在研究结果方面，论文首先在“3.1 Geographic Distribution and Epidemiological Profiling”中指出，研究人员在4329份猫呼吸道拭子中检出579份M. felis阳性样本，总阳性率为13.37%，证实该病原已在我国猫群中广泛存在。地域分布呈显著异质性，其中广西、河北、辽宁和云南阳性率较高，而山西、河南和上海较低。按来源分析，部分省份阳性样本主要来自猫舍，另一些省份则主要来自宠物医院，而浙江、安徽、河南和山西的阳性样本仅见于流浪猫群体。进一步比较不同区域健康猫与呼吸道症状猫后发现，症状组总体阳性率高于健康组，且这种关联在华东和华中地区尤为显著，说明M. felis在这些地区与呼吸道临床表现关系更密切。在382份有呼吸道症状且M. felis阳性的样本中，单一感染占67.8%，提示该病原并不总是依附于其他病原而作为继发感染存在；在混合感染中，以M. felis+FCV最常见，其次为M. felis+FHV。
在“3.2 Phylogenetic Analysis of 16S rRNA Gene and Morphological Characterization of Mycoplasma Isolates From Cats”部分，研究人员从确诊感染样本中成功获得15株代表菌株。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析，分离株可分为两个主要新分支和一个接近M. gateae的特殊分支。第一类分支在普通PPLO培养基上形成典型“煎蛋样”菌落，并在电镜下呈多形态结构，因此被命名为Myco型；第二类分支则与已知M. felis在系统发育上相对疏远，需在补充氨基酸的培养条件下生长，形成“桑葚样”微菌落，在超微结构上多呈球形，被命名为Morella型。另有M. felis-29未归入上述两型，而是与M. gateae聚为一支，提示其遗传亲缘关系更接近后者。这一结果表明，猫呼吸道支原体存在此前未被识别的重要遗传分化。
在“3.3 Cluster Analysis of Proliferation Dynamics and pH Adaptability in Mycoplasma felis Strains”部分，研究人员比较了15株猫源支原体的生长动力学与培养液pH变化。多数菌株在24—36?h达到生长高峰，但M. felis-28、M. felis-29和M. felis-33的对数生长期延长，增殖模式明显不同。聚类分析将各菌株划分为三个增殖群体，其中一类进入对数期较慢且整体生长较弱，一类增殖迅速但衰退也快，另一类处于中等水平。同时，大多数菌株通过葡萄糖代谢使培养体系酸化，在pH 5.5—6.6附近达到高峰；而M. felis-29则表现为碱化趋势，提示可能通过精氨酸脱氨代谢途径生长。这些结果说明，不同分支不仅在遗传和形态上不同，在代谢策略上也存在明显分化。
在“3.4 Antimicrobial Susceptibility Profiling and Diversity of Mycoplasma felis Clinical Isolates”部分，研究人员检测了15株分离株对多类抗菌药物的MIC。结果显示，氟喹诺酮类整体维持较好活性；替加环素对全部菌株均有效；链霉素硫酸盐和庆大霉素也表现出较强抑菌作用。相比之下，大环内酯类药物敏感性呈现明显二分现象，超过一半菌株对阿奇霉素和克拉霉素表现出高MIC值，提示较广泛的大环内酯耐药；四环素类药物同样表现出较大差异，其中M. felis-168对多西环素的MIC达到32?μg/mL，提示已出现耐药趋势。聚类分析虽未显示Myco型和Morella型完全分离，但Morella型3株菌的药敏谱较为接近，支持其分支内部存在相对一致的药物应答特征。
在“3.5 Virulence Traits of Feline Mycoplasma In Vitro and Vivo”部分，研究人员首先测定不同菌株H2O2产生能力，发现M. felis-29最低，而Morella型的M. felis-8和Myco型的M. felis-28分别是各自分组中H2O2产量最高的菌株。基于这一体外毒力指标，研究人员选择这两株进行猫体内感染试验。结果显示，两株菌均可引起感染猫直肠温度变化和临床异常，但M. felis-28引起的综合临床评分更高，说明其总体致病表现更重。组织病理学进一步证实，感染组肺组织均出现炎性细胞浸润和组织结构损伤，其中M. felis-28导致的肺损伤最为显著，几乎造成组织结构严重破坏；而眼睑组织中，M. felis-8造成更明显的组织损伤和脱落。qPCR组织载量分析显示，M. felis-8在眼睑中的DNA水平显著高于M. felis-28，而M. felis-28在肺组织中的DNA载量显著更高，说明前者更偏向上呼吸道和结膜定植，后者则更偏向下呼吸道尤其肺组织。这一组织嗜性差异与组织病理改变高度一致，是该研究关于“差异性致病力”的核心证据。
在“3.6 Analysis of the Metabolic Inhibition Effect and Cross-Reactivity of Abs and Ags of Mycoplasma felis”部分，研究人员利用MIT评价不同菌株间抗原-抗体交叉反应。结果表明，不同菌株的抗原保守性总体有限。部分菌株如M. felis-47和M. felis-61具有较高同源反应性；M. felis-47抗原与多种异源抗体也呈较强反应，个别组合滴度可达1:16；而M. felis-6抗原则与大多数抗体反应较弱，M. felis-29抗体对多数抗原也几乎无明显反应。该结果说明M. felis不同遗传型之间存在显著抗原差异，一方面提示开发广谱疫苗可能需要兼顾不同分支的抗原成分，另一方面也提示某些特异性较强的菌株可能适合开发高特异诊断抗原。
讨论部分的核心在于，研究人员将流行病学、系统发育、培养表型、代谢行为、药敏特征、组织嗜性和免疫交叉性整合起来，构建了我国猫呼吸道M. felis的较完整认知框架。研究强调，M. felis在中国猫群中并不少见，且具有显著区域差异，猫舍和流浪猫群体均可能构成重要传播场景。更关键的是，该菌并非单一生物学类型，而是存在Myco型与Morella型等不同致病分支，它们在培养需求、代谢方式、H2O2生成能力、靶组织偏好及药物反应性方面均不相同。临床上，这意味着对猫支原体感染的诊疗不能仅停留在“检出或未检出”的层面，而应尽可能结合菌落形态、分子分支和药敏特点实施更精准的干预。此外，有限的交叉保护性提示单一菌株型疫苗可能难以覆盖全部流行毒株，多价或分支覆盖型疫苗策略更具现实价值。
研究结论部分可译为：本研究表明，M. felis在中国猫群中的感染率为13.37%，并鉴定出两个新的分支：Myco型（煎蛋样菌落；具有肺组织嗜性）和Morella型（桑葚样菌落；具有结膜组织嗜性）。菌落形态可直接为靶向治疗提供依据：Myco型肺炎宜选用左氧氟沙星，Morella型结膜炎宜选用多西环素。大环内酯类耐药的出现提示必须加强临床用药管理及氟喹诺酮类药物的规范使用。本研究填补了M. felis在中国全国尺度流行病学资料的关键空白，而对两个新分支的鉴定与表征也显示出其在多价疫苗研发方面具有重要潜力。
