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【包邮】染料法猫血支原体实时定量PCR试剂盒

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猫犬类支原体
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商品参数

染料法猫血支原体实时定量PCR试剂盒

Dye-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma haemofelis

 

货号规格
Mqs-hfe-2020个反应
Mqs-hfe-5050个反应
Mqs-hfe-100100个反应

储存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反复冻融。


试剂盒特点:

1, 特异性识别猫血支原体和犬血支原体,不受猫和犬的其他寄生微生物的干扰。

2, 使用热启动的Taq酶,可抑制非特异性扩增,降低背景荧光。

3, 带有阳性对照样品(组分C),可用于检验试剂盒有效性,以及验证待测样品中是否含有PCR抑制剂。

4, 带有ROX参比染料,帮助校正加样误差和管间差异。

5,带有UDG酶和dUTP,可降低残留DNA的污染。


商品说明

猫血支原体(Mycoplasma haemofelis),或称为猫嗜血支原体、猫附红细胞体,寄生于猫红细胞表面,具多形性,可呈现为球状、环状或杆状,对红细胞有破坏作用,可引起传染性溶血贫血症,有时呈急性发作,可致命;有时呈慢性发作,出现嗜睡、厌食、粘膜惨白及黄疸、发烧、脾脏肿大等症状,并可能出现反复发作。其传播途径为血液传播,包括:吸血昆虫叮咬、咬伤、输血等。

 目前已知寄生于猫血中的支原体有三种:猫血支原体,Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis;在PCR技术出现之前,这三种支原体被统称为猫血巴尔通氏体(Haemobartonella felis)。有报道约14%的贫血猫呈血液支原体阳性。猫血支原体的致病能力强于猫血中的另两种支原体。

 寄生于犬血中的支原体有两种:犬血支原体(Mycoplasma haemocanis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。犬血支原体与猫血支原体亲缘关系非常近,形态也类似,基因序列几乎100%一致。猫可以感染犬血支原体,而犬不能感染猫血支原体。犬血支原体感染后有时不表现出症状,有时可能引起一些症状,包括:脱水、轻度贫血、心跳过速、黄疸、死亡,但是很少引起明显的溶血,除非是做了脾切除手术或者发生了免疫抑制。犬血支原体是犬类中最常见的嗜血支原体,分布极为广泛,阳性率大约在0.5-40%之间。

 嗜血支原体常用的检测方法包括显微镜镜检法和PCR法。镜检法灵敏度低,实验误差大,无法区分支原体种类,易受血液中其他物质以及人工涂片方法的干扰,且支原体易从红细胞表面脱落,造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势,且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比,不仅可以精确定量,而且操作更为方便,更少受环境污染的影响。

 本试剂盒针对猫血支原体的16S rRNA基因的保守区域,设计特异性引物,可准确识别猫血支原体和犬血支原体,仅与Candidatus Mycoplasma haemobos有交叉反应。Candidatus Mycoplasma haemobos寄生于牛血中,不会对本试剂盒的检测产生影响。对320只猫的检测表明,嗜血支原体的总阳性率为43.4%,猫血支原体的阳性率为12.8%。

 本试剂盒包含热启动Taq酶、dNTP(以UTP代替了TTP)、引物、阳性对照品、SYBR Green I染料、ROX染料,和用以防止残余DNA污染的UDG(尿嘧啶-N-糖苷酶),用户只需准备好DNA样品即可使用。

 热启动Taq酶结合了特异性单克隆抗体的DNA聚合酶,在室温下聚合酶活性被抗体抑制。在PCR循环的变性阶段,抗体受热被去除,聚合酶活性恢复,因此获得“热启动”功能,可减少残余DNA的污染,提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

 SYBR Green I可以与DNA双链的小沟结合,结合后在497nm激发光照射下产生520nm的发射光。未结合双链DNA的SYBR Green I基本不产生荧光。因此可以根据荧光值的大小判断溶液内DNA双链的多寡,用于实时检测PCR反应过程中产物的累积量。初始模板浓度越高,反应循环数越高,则双链DNA含量越高,荧光值也就越高。值得注意的是,SYBR Green I也可以结合非特异性PCR产物以及引物二聚体,此时产生的荧光与目标扩增产物无法区分。为了判断荧光信号是否来自目标扩增产物,可以绘制熔解曲线。通过逐步缓慢升温,使双链DNA解离为单链DNA,同时检测荧光值的变化,绘制曲线,根据荧光值观察DNA解链的温度。

 UDG和dUTP可以阻止前次步骤残余DNA的扩增。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基,从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为下几轮PCR的模板。在PCR循环开始前的UDG孵育步骤,可以破坏带有尿嘧啶的PCR产物。经过该去除污染步骤后,UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活,对PCR反应没有影响。

 ROX不参与PCR反应,在PCR反应过程中荧光没有变化,可以提供一条基线用于校正加样误差和管间差异,便于仪器自动分析报告荧光与内参ROX荧光的比值,使定量更准确。ROX染料的激发波长为584nm,发射波长为612nm。用ROX进行校正后可以使实验误差减小十倍左右。


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