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【包邮】探针法猫血支原体实时定量PCR试剂盒

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猫犬类支原体
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商品参数

探针法猫血支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma haemofelis


货号规格
Mqt-hfe-2020个反应
Mqt-hfe-5050个反应
Mqt-hfe-100100个反应

储存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反复冻融。

 

试剂盒特点:

1, 特异性检测猫血支原体和犬血支原体,不受其他基因组干扰。

2, 灵敏度高,最低可检出反应液中的2个基因组。

3, 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点;采用热启动方式,可抑制非特异性扩增,降低背景荧光。

4, 带有阳性对照样品(组分C),可用于检验试剂盒有效性。

5, 带有UDG酶和dUTP,可降低残留DNA的污染。


商品说明

嗜血支原体可以感染很多哺乳动物,包括猫、犬、猪、牛、羊等,也包括人类。猫血支原体(Mycoplasma haemofelis),或称为猫嗜血支原体、猫附红细胞体,寄生于猫红细胞表面,具多形性,可呈现为球状、环状或杆状,对红细胞有破坏作用,可引起传染性溶血贫血症,有时呈急性发作,可致命;有时呈慢性发作,出现嗜睡、厌食、粘膜惨白及黄疸、发烧、脾脏肿大等症状,并可能出现反复发作。其传播途径为血液传播,包括:吸血昆虫叮咬、咬伤、输血等。

目前已知寄生于猫血中的支原体有三种:猫血支原体,Candidatus Mycoplasma haemominutum和Candidatus Mycoplasma turicensis。在PCR技术出现之前,这三种支原体被统称为猫血巴尔通氏体(Haemobartonella felis)。这些细菌粘附在红细胞表面生长,有时会给宿主造成一些疾病,尤其是在猫免疫力下降的时候。有报道约14%的贫血猫呈血液支原体阳性。猫血支原体的致病能力强于另两种支原体。这三种支原体常发生双重或三重感染,猫血支原体往往是检出拷贝数最少的,因此需要单独的检测方法排除另两种支原体的干扰。

寄生于犬血中的支原体有两种:犬血支原体(Mycoplasma haemocanis,旧称Haemobartonella canis)和Candidatus Mycoplasma haematoparvum。犬血支原体与猫血支原体亲缘关系非常近,形态也类似,基因序列几乎100%一致。在实验条件下,猫可以感染犬血支原体,而犬不能感染猫血支原体。犬血支原体可能的临床表现有:无症状、脱水、轻度贫血、心跳过速、黄疸、死亡,但是很少引起明显的溶血,除非是做了脾切除手术或者发生了免疫抑制。犬血支原体是犬类中最常见的嗜血支原体,分布极为广泛,阳性率大约在0.5-40%之间。

嗜血支原体无法在体外培养,因此难以开发蛋白类检测方法。常用的检测方法包括显微镜镜检法和PCR法。镜检法灵敏度低,实验误差大,无法区分支原体种类,易受血液中其他物质以及人工涂片方法的干扰,且支原体易从红细胞表面脱落,造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势,且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比,不仅可以精确定量,而且操作更为方便,更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因的保守区域,设计特异性引物和探针,可以准确识别猫血支原体和犬血支原体,与Candidatus Mycoplasma haemobos有微弱的交叉反应。Candidatus Mycoplasma haemobos寄生于牛血中,不会对本试剂盒的检测产生影响。对1585个猫血样品进行检测,获得45个阳性,其中有25个为与另两种猫嗜血支原体共感染。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探针、阳性对照品、ROX染料,和用以防止残余DNA污染的UDG(Uracil- DNA Glycosylase,尿嘧啶-DNA-糖基酶),用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌(Thermus thermophilus),经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体,在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段,抗体受热被去除,此时DNA聚合酶活性恢复,因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染,提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。


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