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【包邮】染料法嗜血支原体通用实时定量PCR试剂盒

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商品参数

染料法嗜血支原体通用实时定量PCR试剂盒

Dye-quantitative Real-time PCR Kit for Universal Hemoplasma


货号规格
Mqs-hae-2020个反应
Mqs-hae-5050个反应
Mqs-hae-100100个反应

保存条件:保存于-20℃,避免反复冻融。没有反复冻融的情况下,保质期一年。


试剂盒特点:

1, 可作为嗜血支原体通用试剂盒使用,可检测绝大部分目前已知的嗜血支原体。

2, 使用热启动的Taq酶,可抑制非特异性扩增,降低背景荧光。

3, 带有阳性对照样品(组分C),可用于检验试剂盒有效性,以及验证待测样品中是否含有PCR抑制剂。

4, 带有ROX参比染料,帮助校正加样误差和管间差异。

5, 带有UDG酶和dUTP,可降低残留DNA的污染。

6, 本试剂盒灵敏度高,可检出反应液中最少达1-10个基因组。



商品说明

嗜血支原体(Hemotropic mycoplasmas,或hemoplasmas)寄生于多种哺乳动物血液中,附着于红细胞表面,无细胞壁,具多形性,可通过血液传播。嗜血支原体曾被命名为血巴尔通体(Haemobartonella)和 附红细胞体(Eperythrozoon),分类为立克次氏体属,现已重新归类为支原体属。临床上嗜血支原体可引发溶血性贫血症,其他症状还包括:厌食症、昏睡症、脱水、体重减轻、突然死亡等,有时表现为急性发作,也有很多动物感染后症状轻微或无症状。不同种动物感染的嗜血支原体有遗传相似性,提示有跨物种传播的可能性。目前已在猫、狗、猪、牛、羊、驼、鼠等动物中发现嗜血支原体,很多动物的血液支原体感染仍为未知状态。

嗜血支原体尚不能体外培养,一般采用PCR法在血液或组织样本中检测。常规PCR方法较为繁琐,耗时较长,较易产生非特异性扩增;探针法实时定量PCR具有更强的特异性,较少受到残留DNA的污染,较难识别未知物种;SYBR法实时定量PCR可兼具二者的优点,通过熔解曲线来区分不同的PCR产物,提高检测的特异性,相较探针法,又可在一定程度上识别未知物种。

本试剂盒采用SYBR染料法,根据14种嗜血支原体的16S rRNA基因序列,设计通用引物,可识别寄生于常见哺乳动物(如:猫、犬、猪、牛、羊、鼠等)的所有已知嗜血支原体。本试剂盒与真核生物基因组没有交叉反应,与部分人类和鸟类的非嗜血支原体有交叉反应,适合用于检测猫、犬、牛、羊、猪、鼠和驼等动物的组织样本,不适用于人类和鸟类组织样本。在准备样品时应注意严格操作,仔细擦拭取血部位,避免人源及环境污染。使用本试剂盒对93个猫血样本进行检测,获得54个阳性,与物种特异性探针法定量PCR进行比较,检测灵敏度为98.2%,检测特异性为92.1%。

本试剂盒可识别的嗜血支原体包括:Mycoplasma haemofelisCandidatus Mycoplasma haemominutum、Candidatus Mycoplasma turicensis、Mycoplasma haemocanisCandidatus Mycoplasma haematoparvum、Mycoplasma suisMycoplasma wenyoniiCandidatus Mycoplasma haemobos、Mycoplasma ovisMycoplasma haemomurisMycoplasma coccoidesCandidatus Mycoplasma haemolamae、Mycoplasma erythrodidelphisCandidatus Mycoplasma kahanei等。

本试剂盒包含热启动Taq酶、dNTP(以UTP代替了TTP)、引物、阳性对照品、SYBR Green I染料、ROX染料,和用以防止残余DNA污染的UDG(尿嘧啶-N-糖苷酶),用户只需准备好DNA样品即可使用。

热启动Taq酶结合了特异性单克隆抗体的DNA聚合酶,在室温下聚合酶活性被抗体抑制。在PCR循环的变性阶段,抗体受热被去除,聚合酶活性恢复,因此获得“热启动”功能,可减少残余DNA的污染,提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

SYBR Green I可以与DNA双链的小沟结合,结合后在497nm激发光照射下产生520nm的发射光。未结合双链DNA的SYBR Green I基本不产生荧光。因此可以根据荧光值的大小判断溶液内DNA双链的多寡,用于实时检测PCR反应过程中产物的累积量。初始模板浓度越高,反应循环数越高,则双链DNA含量越高,荧光值也就越高。值得注意的是,SYBR Green I也可以结合非特异性PCR产物以及引物二聚体,此时产生的荧光与目标扩增产物无法区分。为了判断荧光信号是否来自目标扩增产物,可以绘制熔解曲线。通过逐步缓慢升温,使双链DNA解离为单链DNA,同时检测荧光值的变化,绘制曲线,根据荧光值观察DNA解链的温度。

UDG和dUTP可以阻止前次步骤残余DNA的扩增。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基,从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为下几轮PCR的模板。在PCR循环开始前的UDG孵育步骤,可以破坏带有尿嘧啶的PCR产物。经过该去除污染步骤后,UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活,对PCR反应没有影响。

ROX不参与PCR反应,在PCR反应过程中荧光没有变化,可以提供一条基线用于校正加样误差和管间差异,便于仪器自动分析报告荧光与内参ROX荧光的比值,使定量更准确。ROX染料的激发波长为584nm,发射波长为612nm。用ROX进行校正后可以使实验误差减小十倍左右。

 

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